Lors du Congres international de Biochimie organisé à Marrakech (Maroc) en Mai 2004, le thème relatif au Biotechnologies a connu un grand nombre d'interventions. Les communications émanant principalement de la France et des pays du Maghreb étaient remarquables

Etude cinétique de la réaction d'acétylation des protéines de pois dans un réacteur agité

N. NASRALLAH, l. BOUCHENAFA & A. BENSMAILI

USTHB, Faculté de génie mécanique et génie des procédés, Laboratoire de génie de la réaction chimique, BP 32 EL alia Bab Ezzouar Alger, Algerie. E-mail: nas_nour@yahoo.fr

L'objectif de ce travail consiste d'abord à étudier l'hydrodynamique dans un réacteur agité avant d'effectuer la cinétique de la réaction d'acétylation des protéines de pois. L'étude de l'hydrodynamique dans un réacteur agité en configuration ouvert et fermé en utilisant la distribution des temps de séjours (DTS) a été effectuée pour caractériser l'écoulement à l'intérieur du réacteur. La technique la plus couramment utilisée est une méthode conductimétrique (méthode des traceurs) ; utilisant généralement la soude comme traceur et l'eau déminéralisé comme fluide de travail.
Sur la base du temps de mélange, les résultats obtenus montrent que la qualité de mélangeage est meilleure lorsque le réacteur est muni de deux turbines montée sur un même arbre assurant ainsi une bonne turbulence du fluide, ainsi que le système ouvert présente les plus faibles valeurs de volume mort dans la plus part des cas étudiés, cette caractéristique du mélange est déjà intéressantes pour d'éventuelles applications industrielles. De plus, les industriels s'intéressent beaucoup plus aux appareils qui fonctionnent en continu, car il bénéficient les avantages de régime permanent et d'une assistance moindre. Après la caractérisation du réacteur agité, nous avons étudié la réaction d'acétylation sur l'isolat de pois. L'acétylation intéressent les groupements aminés des protéines. Au cours de la réaction, il se produit une hydrolyse spontanée de l'anhydride en acide carboxylique correspondant d'où une chute de pH compris entre 7 et 9. La modification des protéines par acétylation permet d'augmenter les propriété fonctionnelles tel que leur solubilité en milieu aqueux et l'augmentation de leur propriété tensioactif et en étudié en particulier la sélectivité de la réaction qui est en compétition avec la réaction de l'hydrolyse de l'acide acétique.
Nous avons suivi d'une manière satisfaisante la cinétique de la réaction d'acétylation des protéines de pois dans un réacteur agité fermé par la méthode conductimétrique au moyen d'une sonde Tacussel. Une étude cinétique de la réaction qui permettra de déterminer d'une part, les conditions opératoires optimales susceptibles de conduire à des taux de conversion intéressants, et d'autre part les paramètres cinétiques de la réaction tels que ; la constante de la vitesse, ainsi que l'énergie d'activation correspondante.

Mots-clés: réacteur agité; acétylation, protéines, acétylation des protéines, pois, isolat de pois, hydrodynamique d'un réacteur

Purification et caractérisation d'une bactériocine anti-Listeria produite par Enterococcus faecium F420 isolé à partir de lait cru de chèvre

F. ACHEMCHEM1,2, J. ABRINI1 , M. MARTINEZ-BUENO2, E. VALDIVIA2 & M. MAQUEDA2
1Département de Biologie, Groupe de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté des Sciences, Université Abdelmalek Essaâdi, Tétouan, Maroc, 2 Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada, Espagne

Les bactéries lactiques sont connues par leur capacité d'inhiber dans les aliments le développement de bactéries pathogènes et de détérioration. Cette capacité d'antagonisme est attribuée à la production de métabolites antimicrobiens tels que les bactériocines. Ces derniers sont des composés protéiques secrétés dans le milieu extracellulaire et qui présentent un mode d'action bactéricide. Enterococcus faecium F420 a été isolé à partir de lait cru de chèvre. La recherche de l'antagonisme bactérien dans le milieu solide a été réalisé suivant la méthode de double couches dans des conditions qui éliminent l'effet de l'acide lactique et du peroxyde d'hydrogène. L'activité antagoniste de la souche E. faecium F420 est dirigé essentiellement contre Listeria monocytogenes et des souches du genre Enterococcus. Les substances inhibitrices produites par la souche F420 sont détruites par la trypsine et la protéase, ce qui indique que les agents actifs sont de nature protéique. Ces substances retiennent leur activité antimicrobienne après traitement à 100ºC pendant 5 min, 80ºC pendant 10 min et 60ºC pendant 30 min et elles sont stables à pH acide et basique. La production de la bactériocine, dénommée entérocine F420, commence dès le début de la phase logarithmique de croissance de la bactérie productrice. La purification de l'entérocine F420 a été réalisée en trois étapes successives : chromatographie sur gel d'amberlite XAD-16, suivie de chromatographie sur gel C-18 et finalement par chromatographie liquide haute performance en phase inverse (RP-HPLC). La purification par RP-HPLC a révélé l'existence d'un seul pic doté d'activité antibactérienne. La masse moléculaire de la bactériocine purifiée a été estimée par spectrométrie de masse (MALDI-TOF-MS; Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of Flight Mass Spectrometry) à 4628,45 Da. Le séquençage partiel du peptide F420 a montré une grande homologie à l'entérocine P. La souche bactériocinogène E. faecium F420 et sa bactériocine montrent des potentialités très intéressantes pour leur application dans la lutte contre Listeria monocytogenes dans des systèmes alimentaires. Cette application concerne les produits laitiers en général et notamment le jben de chèvre élaboré de façon artisanale et dans des conditions hygiéniques no contrôlées.

Mots clés : Lait de chèvre, bactériocines, bactéries lactiques, Enterococcus faecium, Listeria monocytogenes

Biosynthèse de déoxynivalénol et composés volatils odorant par Fusarium culmurum cultivé sur blé dur

A. BENZEKRI1, R. IRAQI1., A. BOUSETA1, M. MOUTAOUAKKIL1 & S. COLLIN2.
1Laboratoire de Biochimie Appliquée, UFR de Biochimie Appliquée et Sciences Alimentaires, Faculté des Sciences Dhar El Mahraz Fès, Maroc, 2Laboratoire de Brasserie et des industries alimentaires, UCL, Belgique.
Email : aminabouseta@hotmail.com

Le déoxynivalénol est une mycotoxine du groupe B des trichothécènes, synthétisée principalement par Fusarium graminearum et Fusarium culmurum. Cette mycotoxine engendre des intoxications tant chez les humains que les animaux d'élevage. La recherche de moyen rapide de prédiction de DON est indispensable pour éviter les pertes économiques et les conséquences sanitaires graves.
L'objectif du présent travail est de mettre en évidence les composés volatils indicateurs de DON et/ou de champignons producteurs. L'évaluation de la production de cette mycotoxine et de composés volatils a été réalisée sur des cultures de blé humidifié, ensemencé par des souches de Fusarium culmurum et incubé à 28°C pendant 3 et 21 jours. Au terme de cette période, la DON est extraite par un mélange acétonitrile/eau (80/20) et l'extrait purifié sur MycoSep a été analysé par Chromatographie en Phase Gazeuse couplée à un Détecteur à Capture d'Electron (GC-ECD). Quant à l'extraction de composés organiques volatils (COV), elle a été réalisée à l'aide du dichlorométhane suivi d'une distillation-extraction simultanée selon la technique de Likens-Nickerson. L'extrait enrichi en substances volatils et exhibant une odeur globale représentative du milieu de culture a été analysé par Chromatographie en Phase Gazeuse couplée simultanément à un Détecteur à Ionisation de Flamme et un Détecteur Olfactif (GC-FID-O) et par Chromatographie en Phase Gazeuse couplée à la Spectrométrie de Masse (GC-MS).
Les résultats ont montré que toutes les souches de F. culmurum étudiées sont capables de synthétiser la DON et la capacité de production variant de 0.2 mg/kg à plus de 100 mg/kg dépend de la souche et du temps d'incubation. L'analyse des composés volatils a montré qu'ils appartiennent à différentes classes chimiques et qu'ils présentent des notes olfactives très variées (florale, fruitée, moisi, …). La biosynthèse de ces COV dépend également de la souche et du temps d'incubation. La corrélation entre la production de DON et de COV a montré que certains COV pourraient servir d'indicateurs de DON.

Ch. GANDONOU, J. ABRINI, T. ERRABII & N.SKALI SENHAJI

Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté des Sciences de Tétouan, Maroc

Le stress salin est l'un des facteurs abiotiques majeurs qui réduit les rendements agricoles de plusieurs cultures. L'une des stratégies utilisées pour limiter l'incidence de ce stress sur la production agricole est la sélection in vitro de génotypes plus résistants. Cette étude qui se situe dans le cadre d'un programme de sélection in vitro de variants somaclonaux de canne à sucre résistants à la salinité a pour principal objectif l'exploration des mécanismes physiologiques et biochimiques impliqués dans la résistance à la salinité au niveau cellulaire chez cette plante.
Pour ce faire, des cals issus de la variété résistante NCO 310 et de la variété sensible CP65-357 salinité à l'échelle de la plante entière) sont cultivés pendant 4 semaines dans des bacaux contenant le milieu de base MS additionné de 3mg/l de 2,4-D et de différentes concentrations de NaCl : 0 ; 17 ; 34 ; 68 et 102 mM. Le milieu est solidifié par l'agar à 0,8%, le pH est ajusté à 5.8 et les bocaux sont transférés dans une chambre de culture à l'obscurité et à 25±1°C.
L'effet du stress salin se traduit par une réduction de la croissance des cals chez les deux variétés mais la variété résistante NCO 310 présente une croissance plus importante que la variété sensible CP65-357. Les teneurs en Na+, Cl- et proline augmentent tandis que celle en K+ diminue chez les deux variétés sous l'effet du sel. Toutefois, la variété résistante NCO 310 accumule moins de Na+ et de proline mais plus de Cl- que la variété sensible CP65-357. De plus, la diminution de K+ est plus faible chez la variété résistante par rapport à la variété sensible. L'implication de ces paramètres dans le mécanisme de résistance à la salinité est discutée.

Mots-clés : stress salin- canne à sucre- Saccahrum sp.- culture in vitro- nutrition minérale- proline- résistance à la salinité

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Utilisation de la RAPD pour la caractérisation de quelques isolats de T. harzianum et son intérêt pratique dans la lutte biologique contre de Sclerotium rolfsii

N. KHATTABI, B. EZZAHIRI, B. OUENZAR & A. BENSLIMANE

Université Cadi Ayyad, Faculté des Sciences-Semlalia, B.P 2390, 40000, Marrakech, Maroc. E-mail: khattabi@ucam.ac.ma

Dans la région des Doukkala, la betterave à sucre est sévèrement attaquée par le champignon tellurique, Sclerotium rolfsii. L'attaque se manifeste par une pourriture partielle à totale des tubercules mûrs.
Le succès de la lutte biologique contre ce pathogène par le champignon antagoniste Trichoderma repose sur le choix de souches performantes à la base de screening par des méthodes appropriées. Aussi pour la mise en œuvre de cette lutte, il importe de détecter les souches efficaces, les identifier et les différencier des autres souches. Pour cela certains auteurs ont préconisé la caractérisation biochimique par RAPD. Ainsi, suite à des tests de l'activité antagoniste des isolats prélevés dans la région des Doukkala et d'autres régions du Maroc, une étude par RAPD a été conduite sur un échantillon d'isolats de Trichoderma harzianum de différentes origines du Maroc. Quatre amorces ont donné une bonne amplification. L'analyse des profils générés a permis l'élaboration d'un dendrogramme. Il ressort que les isolats originaires des Doukkala, de Tadla et de Chiadma forment un groupe assez homogène. Aussi, au sein de ces isolats, nous avons noté des similitudes entre certains isolats. Les isolats génétiquement très proches manifestent un même comportement antagoniste vis- à- vis de S. rolfsii. La technique et les amorces utilisés ont donné des résultats satisfaisants pour la caractérisation des souches de Trichoderma. Ceci aurait un grand intérêt pratique en particulier pour l'identification et la différenciation des isolats potentiellement efficaces vis-à- vis de Sclerotium rolfsii.

Mots clés : Trichoderma harzianum, Sclerotium rolfsii, lutte biologique, RAPD

Séparation, caractérisation et étude de stabilité des pigments de fruits de figuier de Barbarie (Opuntia ficus-indica) (L) Mill.

S. MAATAOUI BELABBES1 , A. HMYENE2, M. KHALID3 et S. HILALI1.

1Laboratoire de Biochimie Nutritionnelle et Alimentaire. Département de Biologie Appliquée et Agroalimentaire. Faculté des Sciences et Techniques. BP 577, Settat, Maroc, 2Laboratoire de Biochimie. Département de Biologie. Faculté des Sciences et Techniques. BP , Mohammedia, Maroc, 3 Laboratoire de Chimie Organique. Département de Chimie Appliquée et Environnement. Faculté des Sciences et Techniques, BP 577, Settat, Maroc.

La séparation des colorants de fruits du figuier de Barbarie de couleur jaune-orange et pourpre, par électrophorèse sur gel de polyacrylamide a été effectuée. La caractérisation par spectrophotométrie et HPLC des pigments ainsi séparés, a montré que la couleur des fruits est due essentiellement au rapport indicaxanthine / bétanine, absorbants respectivement à 484 et 535 nm. La stabilité des colorants d'Opuntia ficus-indica a été étudiée sous l'effet de la température et du pH. L'effet du pH n'est détectable qu'à des valeurs très élevées, alors que l'effet de la température semble être fonction de la nature du pigment, de l'intensité du traitement thermique et du temps d'incubation. L'utilisation de figuier de Barbarie comme source de colorants naturels, reste une possibilité, en tenant compte des facteurs qui influencent leur stabilité.

Mots clés : Opuntia ficus-indica, Colorant, Séparation, Caractérisation et Stabilité.

Contrôle biologique de la pourriture verte des fruits d'agrumes par utilisation de levures antagonistes

N. TAQARORT, L. BOUZERDA, H. BOUBAKER, H. BOUDYACH, O. AKHAYAT & A. AIT BENAOUMAR.

Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté des Sciences Agadir, BP 8106 cité Dakhla Agadir 80000-Maroc. E-mail : aitbenaoumar@yahoo.fr

En post-récolte, la lutte chimique représente le moyen le plus efficace pour le contrôle des pourritures fongiques. Cependant, elle présente des inconvénients multiples. La recherche d'un moyen de lutte alternatif semble être nécessaire et urgente. Dans ce cadre, la lutte biologique est le moyen de lutte le plus prometteux. Le screening des levures antagonistes isolées à partir de la flore épiphyte des fruits d'agrumes a permis de constituer une collection de 21 isolats antagonistes à Penicillium digitatum. L'activité antagoniste des sept meilleurs isolats, vis-à-vis de P.digitatum, a été évaluée. Ces levures peuvent assurer une protection significative des fruits contre la pourriture verte. L'étude de la dynamique de population des isolats L15 et L22 à 25°C dans les blessures et à la surface des fruits a montré un maintien de la croissance, d'où la possibilité du maintien de la protection des fruits lors du conditionnement.

Mots clés : Lutte biologique, Penicillium digitatum, Post-récolte, Agrumes, Levures.

Ingénierie et évaluation fonctionnelle d'un fragment d'anticorps recombinant (Fab) dirigé contre la toxine AahI de scorpion

J. MUZARD, N. AUBREY, P. BILLIALD

Laboratoire Lerai, USM 505, Muséum National d'Histoire Naturelle, 57, rue Cuvier, 75005 Paris, France. E-mail : julien.muzard@free.fr

L'immunothérapie passive qui consiste à administrer à un patient des anticorps (ou fragments d'anticorps) immuns est le seul traitement spécifique des envenimations. Cette approche thérapeutique n'a pas connue de véritables améliorations depuis sa découverte (1896) et repose toujours sur l'utilisation de fragments d'anticorps (Fab ou F(ab)'2) polyclonaux équins (Toxicon, 2003, 41 : 541-57). Les anti-venins ainsi produits présentent de nombreux inconvénients liés d'une part à leur mode de préparation (hétérogénéité inter-lots ; risque de transmission d'agents infectieux ; faible concentration d'anticorps neutralisants) et d'autre part, aux risques toujours associés à l'administration de protéines hétérologues (réactions d'hypersensibilité).
Aujourd'hui, l'ingénierie moléculaire et la bonne connaissance de la structure des anticorps permettent de concevoir de nouveaux formats d'anticorps thérapeutiques à potentiel évolutif. Plusieurs de ces molécules ont déjà été évaluées dans le laboratoire (FEBS Lett., 1999, 442 :183-8 ; Cell. Mol. Life Sci., 2003, 60 : 617-28).
A partir de l'hybridome 9C2 sécréteur d'une IgG murine neutralisant l'action de la toxine AahI du venin de scorpion Androctonus australis, nous avons construit un fragment d'anticorps de type Fab (rFab), produit par des bactéries et purifié par chromatographie sur gel d'agarose couplé à la protéine L. L'affinité de la protéine recombinante pour la toxine est très élevée (KD = 8,2 10-11 M), comparable à celle de l'anticorps naturelle. Le pouvoir neutralisant du rFab a également été évalué de façon comparative avec d'autres formats d'anticorps. Les résultats obtenus seront détaillés.
L'ingénierie moléculaire offre la possibilité d'améliorer ou de moduler les caractéristiques fonctionnelles et structurales du fragment d'anticorps Fab, ce qui ne peut être envisagé pour les fragments d'anticorps produits par les méthodes conventionnelles (Fab et F(ab)'2).

Mots clés : Scorpion, Anticorps, Immunothérapie, Toxine, Fab.

General characteristics of pine seed fatty acid compositions from Tunisia (Pinus halepensis Mill. and Pinus pinea L.)

N. NASRI & S. TRIKI

Laboratoire de Biochimie des Protéines et des Lipides, Campus Universitaire, Tunis 1060, Tunisie. E-mail : Nizar.Nasri@fst.rnu.tn

Fatty acid composition of extracted Pinus halepensis Mill. and Pinus pinea L. seed oils have been established by capillary gaz-liquid chromatography of the methyl esters. Seeds are rich in lipids, 34.6% on a dry weight basis for Pinus halepensis and 48.1% for Pinus pinea. Qualitatively fatty acid composition of both species is identical. For Pinus halepensis, linoleic acid is the main fatty acid, 56.06% of the total lipids followed by oleic (24.03%) and palmitic acids (5.23%). As for Pinus pinea, same fatty acids are found with different pourcentages 47.28%, 36.56% and 6.67% respectively. Pine seed fatty acid compositions indicate the existence of a feeble variability between the major acids in both cases. On the other hand, it seems that there is a remarquable variability from both species of some minor fatty acids. These minor fatty acids would constitute possible molecular indicators to characterize better Tunisian pines provenances.

Keys words: Fatty acid composition/ pine seed oils/ Tunisia

Rôle des phosphatases des ectomycorhizes dans la croissance et l'enrichissement du phosphore chez
le Pin d'Alep

E. OUARRAQI1,2, A. OIHABI1 , A. BENKHALED1, C. EL MODAFAR2

1Laboratoire de Physiologie Végétale, Faculté des Sciences Semlalia, Marrakech, Maroc, 2Laboratoire de Biotechnologie et Phytopathologie Moléculaire, Faculté des Sciences et Techniques Guéliz, Marrakech, Maroc.

L'étude de la croissance des champignons ectomycorhiziens autochtones de la région du Haouz notamment Suillus collunitus (Sc), Suillus bellini (Sb), Suillus mediterraneensis (Sm), Suillus mediterraneensis3532 (Sm3532), Hebeloma mesaupheum (Hm) et Tricholoma terreum (Tt) sur milieu MNM liquide et solide en présence du phosphate organique (Phytate) ou minéral (KH2PO4) a montré la capacité de toutes ces espèces à utiliser les deux formes de phosphate. D'autre part, l'activité phosphatase acide déterminée dans la fraction extracellulaire (filtrat de culture) a montré une augmentation très significative en présence du phytate. Cette augmentation est plus au moins importante selon les espèces mycorhiziennes. Parallèlement, la détermination des teneurs des filtrats de culture en orthophosphates, phosphate total et phosphate organique utilisé en présence de phytate comme source de phosphate dans le milieu de culture a montré des différences interspécifique. Par ailleurs, la mycorhization du Pin d'Alep par les différentes espèces ectomycorhiziennes se traduit par une amélioration de l'activité phosphatase acide dans les différentes fractions cellulaires. En effet, la culture de plants de Pin d'Alep en présence de phosphate organique (phytate) ou minéral (KH2PO4) se traduit par une augmentation très significative de l'activité phosphatase acide. Cette augmentation est plus en présence de phosphate organique. La mycorhization induit une amélioration très significative de la croissance et la nutrition minérale. En présence de phytate, une corrélation positive a été observée entre l'activité phosphatase et l'amélioration de la nutrition minérale et la croissance et du Pin d'Alep.

Mots clés : Pin d'Alep, ectomycorhizes, phosphate organique et minéral, phosphatases, croissance, nutrition minérale.

Ce travail est soutenu par un projet PROTARS (P2T2/05)

Monoclonal C5-1 antibody produced in transgenic alfalfa plants exhibits a N-glycosylation that is perfect for glyco-engineering into human-compatible structures

M. BARDOR1,2*, C. LOUTELIER-BOURHIS3, T. PACCALET1, P. COSETTE4, A-C. FITCHETTE1, L-P. VEZINA5, S. TREPANIER5, M. DARGIS5, R. LEMIEUX6, C. LANGE3, L. FAYE1 & P. LEROUGE1

1 CNRS-UMR 6037, 3 CNRS-UMR 6014 and 4 CNRS-UMR 6522, IFRMP 23, Université de Rouen, 76821 Mont Saint Aignan, France. 5 Medicago. inc., 1020, Route de l'Église, Bureau 600, Sainte-Foy, Québec, Canada, 6 Héma-Québec, 2535, boulevard Laurier, Sainte-Foy, Québec, Canada. 2 Present address: University of California, San Diego, CA, USA.

The perennial legume crop, Medicago sativa (alfalfa), benefits from several agronomic advantages such as the existence of agricultural infrastructures and the possibility to rapidly produce clonal transgenic populations, making it a good candidate for molecular farming applications. The expression of C5-1 monoclonal antibodies in this plant results in the production of a functional and fully assembled molecule, easily purified using a one-step procedure. Structural analysis of the plant-derived antibody show that the recombinant C5-1 bears N-glycans having a a(1,3)-fucose, a ß(1,2)-xylose and two terminal GlcNAc residues linked to the core Man3GlcNAc2. As a consequence, alfalfa plants have the ability to produce high yield of recombinant IgG harbouring a N-glycosylation that is perfect for in vitro or in vivo glycan remodeling into a human-compatible plantibody. For instance, as proof of concept, in vitro galactosylation of the alfalfa-derived C5-1 antibody results in a plantibody harbouring terminal ß(1,4)-galactose residues as observed in the mammalian IgG1.

Key words: alfafa (Medicago sativa), glyco-engineering, N-glycosylation, recombinant antibodies, transgenic plants.

Synthesis and Structure-activity relationship in vitro of antibacterial armed Imidazo[1,2-a]pyrimidines (pyridines)

A. ANAFLOUS1, A. MELHAOUI1, S. ABOURICHA2, M. MIMOUNI1, B. HACHT1, T. BEN-HADDA2, M. MOUEQQIT3, B. EL-BALI4, A. HAKKOU3 & N. BENCHAT2

1Laboratoire de Spéciation et de Surveillance de la Pollution en Mediterrannée (LSSPM). Faculty of Sciences. Oujda, 60000, Morocco, 2 Laboratoire d'Activation Moléculaire (LAM). Faculty of Sciences. Oujda, 60000, Morocco, 3Laboratoire de Biochimie Appliquée (LBA). Faculty of Sciences, Oujda, 60000, Morocco, 4 Department of Chemistry, Faculty of Sciences. Dhar Mehraz, BP 1796 Atlas 30003 Fès Morocco. E-mails: anaflous_a@hotmail.com and benchat@sciences.univ-oujda.ac.ma

A series of 3-functionalized imidazo[1,2-a]pyridines IP : compounds (8, 11 & 14) and 3-functionalized imidazo[1,2-a]pyrimidines IMP : compounds (9, 10, 13, 15 & 16) (figure 1) were prepared by condensation of the chlorinated precursors with amino-2-pyridine or amino-2-pyrimidine. The IP and IMP were first tested for their antibacterial activities in vitro. IMP (c. 15) showed the highest antibacterial activity against Staphylococcus aureus strain (MIC up to 0.70 µg/ml).

Figure 1 : Armed Imidazo[1,2-a]pyrimidines IMP pyridines IP

Compound R X Y Z
(8) C6H5 CH CH O
(9) p CH3O-C6H4 N CH O
(10) m CH3O-C6H4 N CH O
(11) C6H5 CH CH OH
(13) H N CH O
(14) m CH3O-C6H4 CH N O
(15) m CH3O-C6H4 N N O
(16) p CH3O-C6H4 N N O

They were tested for their antitumoral and antimycobacterial activities in vitro. 3 compounds, two IP (11, 14) and one IMP (16) showed the highest antitubercular activity against Mycobacterium tuberculosis H37Rv (up to 100% inhibition). None of these compounds were effective against human tumour cell lines in vitro (Alamar assay) : Lung, (NCI-H460), CNS, (SF-539) and breast, (MCF7). Our results indicate that functionalization in position 3 of the IP and IMP systems is a promising way to prepare novel, potent anti-bacterial compounds. We also investigated the influence of the nature of the atom in position 8 (CH or N) of the IP and IMP skeleton, by comparing the analogous compounds (15) and (16) and showed that the presence of nitrogen atom in this position exhibited increasing antibacterial activity. Further antimicrobial investigations on these compounds are awaited.
Key words: Imidazo[1,2-a]pyrimidines; Imidazo[1,2-a]pyridines; Functionalized arms in position 3; Antibacterial, antitumoral and antimycobacterial activities, Staphylococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis H37Rv.

Production de protéines recombinantes d'intérêt thérapeutique chez la luzerne, après inactivation de l' (1,3)-fucosyltransférase et de la (1,2)-xylosyltransférase

C.SOURROUILLE, MC.KIEFER-MEYER, S.PAGNY, MA.D'AOUST*, L. FAYE & V.GOMORD

CNRS UMR 6037, IFRMP23, G3, UFR des sciences, Université de Rouen, Bâtiment Extension de biologie 76821 Mont Saint Aignan, France, *Medicago inc, 2480, rue Hochelaga Sainte-Foy, Québec, G1K 7P4, Canada.

Les études menées ces dernières années ont démontré que les plantes sont un formidable outil pour produire des protéines recombinantes. En effet, les plantes présentent de nombreux avantages par rapport aux systèmes de production comme les bactéries ou les levures. Tout d'abord, dans les systèmes végétaux, il est possible de produire des protéines d'intérêt à grande échelle et à faible coût. Ensuite, les modifications co- et post-traductionnelles, telles que le repliement et la glycosylation, sont en grande partie identiques chez les plantes et chez les mammifères. Ainsi, les protéines hétérologues exprimées dans les plantes, sont en général actives et stables.
Cependant, pour la production de protéines recombinantes d'intérêt thérapeutique destinée à l'homme, les plantes ne sont pas encore idéales. En effet, les étapes tardives de la glycosylation au niveau de l'appareil de Golgi diffèrent chez les plantes et chez les mammifères. Deux glycosyltransférases typiquement végétales, l' (1,3)-fucosyltransférase et la (1,2)-xylosyltransférase transfèrent du fucose lié en (1,3) et du xylose lié en (1,2) sur les N-glycannes des glycoprotéines végétales et donc aussi des glycoprotéines recombinantes produites dans les plantes transgéniques. Ces deux résidus sucres confèrent à la protéine d'intérêt un potentiel immunogène pour l'homme, ce qui restreint leur utilisation thérapeutique.
Récemment, nous avons cloné et caractérisé pour la première fois, l' (1,3)-fucosyltransférase et la (1,2)-xylosyltransférase chez une légumineuse modèle : la luzerne (Medicago sativa). L'activité et la spécificité de ces enzymes ont été analysées par expression dans les cellules d'insecte. Actuellement, différentes stratégies destinées à inactiver ces deux glycosyltransférases sont à l'étude, afin de diminuer ou supprimer l'ajout des sucres immunogènes (1,3)-fucose et (1,2)-xylose sur les glycoprotéines d'intérêt thérapeutique produites dans la luzerne transgénique.

Mots clés: Medicago sativa, N-glycosylation, glycosyltransférases, protéines recombinantes thérapeutiques.

Approches physiologiques et biochimiques pour la sélection des plantes utiles en phytoremédiation

A. HAKMAOUI1, L. GASPAR3, C. SAJNANI2, É. SARVARI3, M. ATER1& M. BARON2

1 Dpt. de Biologie, UFR Biologie Végétale, Faculté des Sciences, Université Abdelmalek Essaâdi,Tétouan, Maroc, 2 Estación Experimental del Zaidin, CSIC, Granada, Espagne
13Eötvös Loránd University, Department of Plant Physiology, Budapest, Hongrie

La phytoremédiation est définie comme étant : l'utilisation des plantes pour décontaminer ou restaurer des sites contaminés par des polluants de type organique et/ou inorganique. Les plantes utilisées en phytoremédiation ont des caractéristiques spécifiques, nécessaires à cette application comme la tolérance et l'accumulation des polluants.
Dans cette étude on a évalué la tolérance à deux métaux lourds, le cuivre et le cadmium, chez deux macrophytes : le roseau (Phragmites australis (Cav.) Trin. Ex Steudel) et le saule (Salix purpurea L). La tolérance a été estimée à travers différents paramètres, en utilisant des approches complémentaires comme les études photosynthétiques (fluorescence chlorophyllienne, dégagement d'O2 photosynthétique) et biochimiques (analyse électrophorétique des protéines foliaires et racinaires) et l'utilisation des paramètres classiques de la croissance (biomasse et élongation racinaire). Le but est non seulement d'évaluer le niveau de la tolérance chez ces espèces mais également approcher les mécanismes responsables de la résistance vis-à-vis des métaux étudiés. Les résultats obtenus, au niveau des indices de tolérance chez ces deux espèces, sont encourageants et ouvrent des perspectives intéressantes dans le domaine des technologies de phytoremédiation et, tout particulièrement, dans le domaine de rhizofiltration.

Mots clés: Phytoremédiation, métaux lourds, photosynthèse, indice de tolérance, S. purpurea, P. australis

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