Lors du Congres international de Biochimie organisé à Marrakech (Maroc) en Mai 2004, le thème relatif à l'Immunologie a connu un grand nombre d'interventions. Les communications émanant principalement de la France et des pays du Maghreb étaient remarquables

Activation du système immunitaire humain par la Sarcolectine

J-P. M'BIKA, A. ACHOUR & C. CHANY

Laboratoire des interférons et de la sarcolectine; Centre Universitaire, 45 rue des Saints-Pères, 75006 Paris, France.

La Sarcolectine (SCL) est un facteur de croissance qui antagonise l'interféron (IFN). La SCL et l'interféron sont régulièrement exprimés dans tous les tissus humains et animaux que nous avons analysés. La SCl est une protéine de 55kDa contenant 469 acides aminés et dont le gène est localisé dans le chromosome 12 (q12-q13) chez l'homme. La SCl agit 1/ comme lectine en se fixant sur les membranes cellulaires par leurs glycoprotéines, favorisant ainsi l'agglutination cellulaire 2/ stimule la multiplication cellulaire 3/ inhibe le stade antiviral et anti-prolifératif induit par l'IFN.
Nous avons donc cherché à déterminer le rôle joué par la SCL dans le système immunitaire humain en activant les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) en présence et en absence de l'IL2 exogène. Nous avons utilisé de la SCL recombinante (SCLr) ou hypophysaire (SCLhyp) purifiées par chromatographie d'affinité utilisant l'acide N-acétyl neuraminique comme ligand. La stimulation en présence de l'IL2 active le TCR et non les signaux de co-stimulation avec comme conséquences l'expansion clonale des lymphocytes T. Après 3 jours et cela jusqu'au jour 12 de culture, nous avons déterminé la présence de l'interféron ? dans le milieu conditionné. Dans d'autres expériences, nous avons détecté la réapparition de la SCL au-delà de 15 jours de culture par ELISA utilisant des anticorps anti-SCL faits chez le lapin.
En absence d'IL2, la SCL active les lymphocytes T mais l'IFN apparaît tardivement vers le 7ème jour. Cette activation des PBMC par la SCL disparaît quand les cellules sont déplétées de monocytes/macrophages. L'analyse par cytométrie de flux a montré que les PBMC activés étaient de phénotype CD3+CD4+CD45RO+, c'est-à-dire les lymphocytes T4 mémoires. Nous avons aussi remarqué par cytométrie en flux que cette activation s'accompagnait de l'induction des cytokines de type inflammatoire dont l'IL6 et l'IL8.
Nous pouvons donc dire que la SCL active les PBMC et quelle agirait comme une cytokine et que cette activation ne se fait qu'en présence des macrophages et qu'elle est augmenté en présence de l'IL2 exogène.

Mots clés : Sarcolectine, interféron, PBMC, prolifération cellulaire

Caractérisation biochimique et immunologique du venin de scorpion d'Androctonus australis hector détoxifié par irradiation gamma

L. ABIB & F. LARABA-DJEBARI

Laboratoire de biologie cellulaire et moléculaire, Faculté des sciences biologiques, USTHB Bab Ezzouar, Alger, Algérie, Laboratoire de recherche et développement sur les venins, Institut Pasteur d'Algérie, Algérie. E-mail: flaraba@ibnsina.ands.dz

L'étude épidémiologique de l'envenimation scorpionique en Algérie durant ces dernières années a montré combien ce problème médico-social est grave, non seulement par sa fréquence mais surtout par sa létalité.
Dans le cadre de ce travail, nous avons détoxifier le venin de scorpion Androctonus australis hector (Aah) par un procédé d'irradiation gamma en utilisant deux doses (1 kGy et 2 kGy) et étudier ses effets métaboliques sur le foie, coeur et rein de souris. Une approche immunologique pour étudier le pouvoir immunogénique des deux venins irradiés a été également entreprise.
En effet, l'utilisation de deux doses d'irradiation gamma (1 kGy et 2 kGy) émis par Cobalt 60C ont permis de réduire la toxicité du venin de scorpion Androctonus australis hector. La caractérisation protéique des venins natif et irradiés a révélé des profils élèctrophorétique complètement modifiés qui serait probablement due à la fois à la dégradation et l'agrégation des protéines du venin expliquant en partie cette détoxification. De plus, l'étude métabolique a montré que les perturbations enzymatiques observées au niveau du foie, coeur et rein après envenimation des souris avec le venin irradié à 1 kGy avec une forte dose de 85 µg/ 20 g sont moins importantes que celles induites par le venin natif pour les deux doses du venin natif sublétale (10 µg/ 20 g) et létale (34 µg/ 20 g). En effet, une diminution du taux des activités enzymatiques, transaminases (GOT et GPT), lactate déshydrogénase (LDH), créatine kinase (CK) et phosphatase alcaline (PAL) est observée dans les trois organes se traduisant par leur élévation dans le sérum. Cette augmentation du taux des enzymes dans le sérum serait probablement due à sa diffusion anormale à partir du tissu altéré vers le sang. En ce qui concerne les souris envenimées avec le venin irradié à 2 kGy avec une dose de 85 µg/ 20 g, aucune perturbation enzymatique n'est constatée. La caractérisation immunologique des immunsérums obtenus après hyper immunisation de lapin avec les venins irradiés à 1 kGy (Svir1) et 2 kGy (Svir2) révèle que les propriétés immunogéniques du venin de scorpion Androctonus australis hector sont résistantes aux rayonnements ionisants gamma. Les deux venins irradiés ont permis d'obtenir des immunsérums avec un titre testé par ELISA et une capacité neutralisante meilleure à ceux de l'immunsérum anti-venin natif. En outre la purification des IgG spécifiques au venin natif dans les immunsérums de lapin antivenins irradiés par chromatographie d'affinité sur Sépharose 4B activé au BrCN et couplé au venin total d'Androctonus australis hector révèle que ces immunsérums présentent un taux en anticorps (8,36% et 5,05%) respectivement pour Svir2 et Svir1 plus important à celui d'immunsérum antivenin natif (3,61 %).

Accumulation des macrolides et des kétolides dans les polynucléaires neutrophiles humains. Implication du complexe enzymatique NADPH oxydase.

H. ABDELGHAFFAR & M.T. LABRO

Faculté des Sciences et Techniques, Mohammedia, Maroc.
E-mail : ahouria@caramail.com

Les antibiotiques macrolides s'accumulent dans les cellules hôtes particulièrement les phagocytes. Cette accumulation est essentielle pour leur bioactivité intracellulaire (> 10- à 200 fois la concentration extracellulaire) peut induire des modifications des activités cellulaires. Nous avons comparé l'accumulation de la roxithromycine et l'azithromycine à quatre kétolides, qui appartiennent à la nouvelle classe des dérivés semi-synthétiques de l'érythromycine A, caractérisées par la présence d'un groupement 3 cétonique à la place du L-cladinose en position 3 du noyau lactonique. Ils sont fortement accumulés par les PN d'une manière temps dépendante et semblent avoir un effet anti-inflammatoire in vitro et dans quelques modèles animaux. De plus, ils inhibent les capacités oxydatives des polynucléaires neutrophiles (PN).
Nous avons en premier lieu analysé la relation structure-activité des macrolides, en rapport avec leurs effets sur la production d'oxydants et la dégranulation et démontré que la présence du L-cladinose est nécessaire à l'inhibition de l?explosion oxydative et à la stimulation de l'exocytose. La modulation de ces deux fonctions semble être en relation avec l'interaction de ces molécules avec une (ou plusieurs) voie transductionnelle du PN. La voie phospholipase D/phosphatidate phosphohydrolase (PLD/PPHA) a été analysée. La PLD catalyse l'hydrolyse du phosphatidylcholine pour produire de la choline et de l'acide phosphatidique (AP) ; ce dernier peut être métabolisé en diacylglycérol (DAG) par la PPHA. L'AP semble jouer un rôle primordial pour l'induction de la dégranulation, alors que le DAG, seul ou en synergie avec l'AP semble être crucial pour l'activation de la NADPH oxydase.
Nous avons également démontré que la roxithromycine interfère avec la voie PLD/PPHA des PN au repos et stimulés. Elle stimule directement l'activité PLD des PN au repos, alors qu'elle inhibe cette activité lorsque les cellules sont stimulées par différents agonistes. De plus, la roxithromycine inhibe la production de DAG des PN au repos et stimulés. Des résultats similaires sont obtenus avec les autres macrolides possédant le L-cladinose.

Y. BAKRI 1,2, S. SARRAZIN 2, U. P. MAYER 2, S. TILLMANNS 2, A. BONED 2 & M. H. SIEWEKE 2

1Laboratoire de Biochimie-Immunologie, JER3012 associée à l'AUF, Faculté des Sciences, Rabat, Maroc, 2C. d'Immunologie de Marseille-Luminy (CIML), Campus de Luminy, Case 906, 13288 Marseille Cedex 09, France.

La différenciation des monocytes en macrophages ou en DC dépendent des micro environnements et de l'état inflammatoire du tissus. A l'homéostasie s'établie une balance entre les population de macrophages et DC. La rupture de cette balance en faveur de la différentiation DC peut induire certains désordres auto-immuns comme le lupus érythémateux disséminé ou dans l'arthrite rhumatoïde. Dans le cas des cancers, des facteurs secrétés par les cellules tumorales inhibent le développement des DC et affectent aussi leur fonction en faveur de cellules myéloïdes immatures et de monocytes /macrophages. La culture in vitro, l'amplification et la manipulation des DC seraient facilitées par la connaissance des facteurs qui déterminent le programme contrôlant l'expression des gènes spécifiques à ce type cellulaire et comment leur destinée est distinguée de celle des macrophages. Un espoir est placé dans la manipulation de ces cellules en immunothérapie des cancers et des protocoles de vaccination (VIH, VHC…). Les molécules de surface qui caractérisent les DC et les cytokines qui induisent leur différenciation ont été étudiées. Les facteurs de transcription qui déterminent cette lignée sont encore peu connus. Dans cette étude, on s'est intéressé aux facteurs de transcription MafB et PU.1. On a utilisé une protéine de fusion de PU.1 avec le récepteur à l'oestradiol (PUER). Cette protéine est introduite dans les cellules par infection retrovirale, elle est fortement exprimée mais n'est active que lorsque les cellules sont stimulées avec l'oestradiol. On a infecté des progéniteurs myéloïdes primaires avec la protéine PU.1 inductible, son activation expérimentale induit la différentiation de ces progénitures en DC mais non en macrophages. La surexpression d'un autre facteur de transcription appelé MafB dans ces mêmes progéniteurs induit en revanche leur différentiation en macrophages. On montre que la différenciation des DC par surexpression de PU.1 dans les lignées myéloïdes humaines ou les monocytes est indépendante de cytokines exogènes. En parallèle, dans les DC différenciées en culture en présence de GM-CSF et d'IL-4 on observe une forte expression de PU.1 par comparaison aux monocytes ou aux macrophages différenciés en présence de M-CSF. Les monocytes et les macrophages expriment fortement MafB qui reste peu détectable dans les DC. Dans les lignées myéloïdes infectées par PUER puis induites à se différencier en macrophages avec la vitamineD3, l'expression de MafB est fortement induite, l'activation de PU.1 dans ces cellules inhibe l'expression de MafB et les réoriente dans la voie DC. Dans des lignées macrophagiques transfectées par un gène rapporteur sous le contrôle du promoteur MafB, l'expression de PU.1 exogène semble réprimer l'activité de Maf endogène. En revanche, on observe que la surexpression de MafB dans les progénitures myéloïdes inhibe leur différentiation en DC. On propose qu'une importante activité de PU.1 dans les progéniteurs myéloïdes et les monocytes gouverne la voie de différentiation DC et inhibe celle des macrophages en répriment l'expression et l'activité de MafB.

Mots clés : Facteurs de transcription, PU.1, cellules dendritiques, MafB, macrophage, différentiation myéloïde

Etude biochimique de l'effet immunomodulateur des acides gras insatures extraits des huiles de poisson, d'argan et d'olive

A. BENZARIA1, N. MESKINI1, M. DUBOIS2, M. LAGARDE2 & A.F. PRIGENT2

1Laboratoire de Biochimie, FST de Mohammedia, Maroc, 2 Laboratoire de Physiopathologie des Lipides et Membranes (PLM) UMR 585 INSERM/ INSA-Lyon, IMBL, Villeurbanne, France.

Les acides gras insaturés (AGI) présents dans les huiles de poisson, d'argan et d'olive suscitent un grand intérêt pour le traitement des maladies cardiovasculaires, autoimmunes et inflammatoires. Les AGI les plus connus pour leurs effets immunomodulateurs sont ceux des huiles de poisson, notamment l'acide docosahexaénoïque (DHA).
Dans ce travail nous avons étudié l'effet d'un enrichissement des thymocytes de rat avec les principaux AGI de ces huiles, les acides linoléique (LA), oléique (OA), eicosapentaénoïque (EPA) et docasahexaénoïque (DHA). On a observé un enrichissement significatif des phospholipides avec chacun des acides gras, accompagné d'une diminution significative de la réponse proliférative à la concanavaline A (ConA). Nous avons également étudié l'effet de ces AGI sur l'activité phospholipase D (PLD), enzyme connue pour réguler la prolifération cellulaire. Les AGI n'ont pas d'effet sur l'activité PLD basale des thymocytes de rat. Par contre, ils activent la PLD des cellules stimulées par la ConA, le DHA étant l'AGI le plus actif.
Dans les cellules hématopoïétiques, la PLD est associée aux radeaux lipidiques, structures particulières de la membrane plasmique dites microdomaines considérées comme des plates-formes de signalisation cellulaire. L'enrichissement des thymocytes en DHA puis leur stimulation par la ConA, induit un déplacement de la PLD hors des radeaux lipidiques. Il est probable que l'association de la PLD aux microdomaines la maintienne dans une conformation peu active, et que le DHA l'active en perturbant son association aux microdomaines.

Profil immunologique des Leucémies Aigues Lymphoblastiques chez l'enfant au Maroc : comparaison avec les données cliniques

N. DAKKA1, H. BELLAOUI2, M. KHATTAB3, L. AOUED3,
A. BENJOUAD1.

1Laboratoire de Biochimie-Immunologie, Université Mohamed V, Faculté des Sciences Rabat, Maroc, 2CNRST, 52 Avenue Omar Ibn Alkhattab, BP 8027-Agdal, Rabat, Maroc, 3Hôpital d'enfants, Service de Pédiatrie II, Rabat, Maroc.

Les données cliniques, cytologiques et cytochimiques ne permettent pas toujours de poser le diagnostic des leucémies. Cependant, l'immunophénotypage des leucémies aigues, par cytométrie de flux, permet de définir le caractère myéloblastique ou lymphoblastique (B ou T) ; il permet également dans certaines situations de confirmer le diagnostic ou de le poser (LAM0, leucémies indifférenciées, leucémies multiphénotypiques) ou encore d'apporter quelques éléments de pronostic.
Dans cette étude nous nous sommes fixés comme objectif de déterminer la fréquence des types immunologiques des leucémies lymphoblastiques au Maroc, par analyse en cytométrie de flux, et de confronter les résultats obtenus avec les données cliniques.
L'étude a porté sur 100 LAL (leucémies aigues lymphoblastiques) de l'enfant, dont la tranche d'âge se situe entre 1 et 15 années. Chez ces sujets, l'étude cytologique a montré que les LAL1 sont les plus fréquentes (61%), suivies par les LAL2 (34%) puis les LAL3 (5%). L'étude immunophénotypique de ces leucémies au moyen d'un panel d'anticorps spécifique a permis de les classer en deux catégories : les LAL B (62%) et les LAL T (38%). Les marqueurs qui sont le plus fréquemment rencontrés dans les LAL T sont le CD2, CD5 et CD7 et dans les LAL B, ce sont les CD19 et HLA-DR. Il est à noter que le taux des LAL T (38%) de l'enfant obtenu dans cette étude est supérieur à celui rapporté aux Etats Unies d'Amérique et en Europe (autour de 20%).
L'analyse des données cliniques de ces patients indique une répartition quasi égale de la splénomégalie dans les deux types de LAL, avec 53% dans les LAL B et 47% dans les LAL T. En revanche, l'hépatomégalie et l'élargissement médiastinal sont plus associés au phénotype T avec 62% et 71% respectivement.
L'utilisation d'un panel d'anticorps plus élargi permettrait une classification immunologique plus précise de ces leucémies et apporterait pour certaines d'entre elles des éléments de diagnostic ou de pronostic.

Mots clés : Cytométrie de flux, Immunophénotypage, LAL, Diagnostic, Pronostic

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